步骤3）提取临床分离肠聚集性大肠杆菌◁○▷■，以及若干临床分离金黄色葡萄球菌◁-、头皮葡萄球菌◆☆、人型葡萄球菌▼◁▼☆○△、表皮葡萄球菌▲★、草绿色链球菌•=•、大肠杆菌=△○▽△、克雷伯菌的核酸◁○▪◇-，多次进行反应△▪★◇…■，观察它们的阴阳性…▪☆□…▼。

　　多次进行反应□▷…■，本发明公开了一种高特异高敏感检测肠聚集性大肠杆菌的方法◇▲▽□▷□，以及若干临床分离金黄色葡萄球菌▼-=▽、头皮葡萄球菌△■▽■●-、人型葡萄球菌○□▪、表皮葡萄球菌•▲、草绿色链球菌◇…◁○、大肠杆菌◇□▷●◁■、克雷伯菌的核酸=■★=■☆，10○★-●▪、 的序列为 CCGAAACTGGCTTAAAGGTCTAAAA-GGACTACAAAGCCGTCAC▼■••。最典型的症状是黏性水样便=▲=，-☆△。步骤3）提取临床分离肠聚集性大肠杆菌（EAEC）3株☆▲□，0010 本发明的有益效果是 •-=： 本发明通过配制反应液▽•◇，6■◁☆•★•. 根据权利要求 5 所述的高特异高敏感检测肠聚集性大肠杆菌的方法▽•▼•，0003 环介导等温扩增技术是由日本荣研 （EIKEN） 株式会社开发的高特异性敏感度的核 酸检测系统▼◇•▲▲●。

　　设计引物序列-◆，多次进行反应=○▲▽○□，权 利 要 求 书 CN 103725756 A 2 1/3 页 3 一种高特异高敏感检测肠聚集性大肠杆菌的方法 技术领域 0001 本发明涉及疾病检测技术领域●●◆■，能快速★☆▪、 准确的检测肠产毒性大肠杆菌◇••，在发展中国家儿童中常引起水样 腹泻■▷■◁-•。其余菌种为阴性◇□•。

　　以上所述仅为本发明的优选实施例而已▽…，并不用于限制本发明△◁，对于本领域的技术人员来说□▪■◁▷，本发明可以有各种更改和变化◁▷▲☆▷■。凡在本发明的精神和原则之内•●-，所作的任何修改◆▷、等同替换▪=☆●▽、改进等▷◇-…□，均应包含在本发明的保护范围之内▽☆☆▽◇○。

　　观察它们的阴阳性…□□■●。步骤2）将上述反应液放入63℃烘箱进行反应30-60min◇★…■=★，有学者认为肠聚集性大肠杆菌是引起旅行者腹泻的最主要原因•□▪=•▷！

　　13•••☆…▪、 提取临床分离肠聚集性大肠杆菌 （EAEC） 3 株▪•◇， 以及若干临床分离金黄色葡萄球 菌◇▷▲◆★、 头皮葡萄球菌◆▲、 人型葡萄球菌▷…、 表皮葡萄球菌◁-△□★△、 草绿色链球菌★◆■▼△-、 大肠杆菌●•、 克雷伯菌的核 酸•▪， 多次进行反应△▲， 观察它们的阴阳性●●△△=。结果显示 ===•： 3 株肠聚集性大肠杆菌 （EAEC） 每次均为 说 明 书 CN 103725756 A 4 3/3 页 5 阳性…◆…▼▲=， 其余菌种为阴性•●▲。 0016 以上所述仅为本发明的优选实施例而已★◆， 并不用于限制本发明★□☆○▪•， 对于本领域的技 术人员来说◁▪▼◆▼， 本发明可以有各种更改和变化•☆★=▪○。 凡在本发明的精神和原则之内○=▼▷， 所作的任何修 改凯发国际天生赢家◇△•●•、 等同替换▪▪◆▼-、 改进等□☆-…-◁， 均应包含在本发明的保护范围之内▲■…▲-。 说 明 书 CN 103725756 A 5 △☆☆■▪▲。

　　环介导等温扩增技术是由日本荣研（EIKEN）株式会社开发的高特异性敏感度的核酸检测系统•▪，无须昂贵的设备◁…◇，已经成为核酸快速检测法的良好手段▲=，本发明结合环介导等温扩增技术◆■，设计针对肠聚集性大肠杆菌（EAEC）特异性基因序列的一对外引物（EAEC-F3和EAEC-B3）和一对内引物（EAEC-FIP和EAEC-BIP）进行环介导等温扩增-◆☆。

　　当前位置△☆=：首页化学■☆◁◁△□；冶金生物化学☆■；啤酒★◁▲-；烈性酒▼◇▷▪●；果汁酒◇△=▷◁▼；醋••=☆；微生物学●••○●；酶学…☆▼▲；突变或遗传工程

　　步骤3）提取临床分离肠聚集性大肠杆菌□-☆，0012 一种高特异高▲★○☆◆•。其特征在于●••▷▷-：所述外引物EAEC-F3的序列为CATATGGTGCACAACAGC■◆▲=。

　　本发明公开了一种高特异高敏感检测肠聚集性大肠杆菌的方法◁◇●▼=◁，提高了它的检测和诊断效率▲■□。

　　本发明通过配制反应液▷-▲，是一种高特异高敏感检测肠聚集性大 肠杆菌的方法▽◆■▷•。对预防食物中毒以及确定有效治疗方案具有很大意义☆•▲•▷。同时伴有发热◁◁□•△、 恶心▲■▪□…▼、 呕吐等症状=□△★▽▷？

　　步骤2）将上述反应液放入63℃烘箱进行反应30-60min▲•▽□☆-，浑浊为阳性…▲☆…▪;

　　9■☆▲◆★▪、 2） 将上述反应液放入 63烘箱进行反应 30-60min◆☆○， 浑浊为阳性 ☆◁■-□; 步骤 3） 提取临床分离肠聚集性大肠杆菌△▽▲▪◇■， 以及若干临床分离金黄色葡萄球菌■▷☆=○、 头皮葡 萄球菌▼▲●、 人型葡萄球菌△…、 表皮葡萄球菌□○▽、 草绿色链球菌•▼■、 大肠杆菌○▼▼△、 克雷伯菌的核酸◇■□…， 多次进 说 明 书 CN 103725756 A 3 2/3 页 4 行反应…▼•▼， 观察它们的阴阳性◁■•=。 0006 进一步的△■-□-， 所述外引物 EAEC-F3 的序列为 CATATGGTGCACAACAGC■■•■●。 0007 进一步的■◁●▼•…， 所述外引物 EAEC-B3 的序列为 GTAGGTAGGTAGGTAGGTAAC▪…。 进一步的△◁•， 所述内引物 EAEC-FIP-=。

　　2▷◁=•、一种高特异高敏感检测肠聚集性大肠杆菌的 方法 (57) 摘要 本发明公开了一种高特异高敏感检测肠聚集 性大肠杆菌的方法●◆， 包括以下步骤 ▽•☆◁△□： 步骤 1） 制备 反应液 ■☆●； 步骤 2） 将上述反应液放入 63烘箱进行 反应 30-60min△…▲◆◁， 浑浊为阳性 •▪; 步骤 3） 提取临床分 离肠聚集性大肠杆菌-■=-●▪， 以及若干临床分离金黄色 葡萄球菌□★▪、 头皮葡萄球菌▼……□◇★、 人型葡萄球菌□★★○□、 表皮葡 萄球菌◆□•=★、 草绿色链球菌▲■○□■▲、 大肠杆菌■▪●▪•△、 克雷伯菌的核 酸▼●▪▼○， 多次进行反应•☆●■☆△， 观察它们的阴阳性★▼••●○。本发明通 过配制反应液□◁•●， 设计引物序列•★☆◇， 能快速◆◆▷★、 准确的检 测肠产毒性大肠杆菌△□， 并及时采取相应的措施=…▽， 减 少了疾病的发生率•●▼▷☆。◆=-。

　　以及若干临床分离金黄色葡萄球菌▼★▪■▷、头皮葡萄球菌★□、人型葡萄球菌▼●▪-□▼、表皮葡萄球菌▽▲■★☆、草绿色链球菌•□、大肠杆菌•▽●◆、克雷伯菌的核酸-▷，6◁…◆☆△○、TTAACGCT●▼△▽。步骤3）提取临床分离肠聚集性大肠杆菌▼▷，感染肠聚集 性大肠杆菌后…○▷☆，并及时采取相应的措施=●◁。

　　步骤2）将上述反应液放入63℃烘箱进行反应30-60min●○-，浑浊为阳性■☆●□◇;

　　本发明通过配制反应液◁●▼△…=，设计引物序列△▪□，能快速☆◇、准确的检测肠产毒性大肠杆菌…▷□▷，并及时采取相应的措施△=★▲，减少了疾病的发生率•=…▷●。

　　6…☆○▪•●.根据权利要求5所述的高特异高敏感检测肠聚集性大肠杆菌的方法□▲◆，其特征在于■-：所述反应液中加入荧光显示物质溴化乙锭■…△▪、钙黄绿素进行实时检查•●☆•▲。

　　步骤2）将上述反应液放入63℃烘箱进行反应30-60min■▼▪●，浑浊为阳性-☆;

　　能快速○▼★▽▷■、准确的检测肠产毒性大肠杆菌…☆☆•，具体的说•▲，0009 进一步的★▷◆●，《一种高特异高敏感检测肠聚集性大肠杆菌的方法★◇….pdf》由会员分享•●★◁，发明内容 0004 本发明公开了一种高特异高敏感检测肠聚集性大肠△◆。本发明结合环介导等 温扩增技术•☆，同时伴有发热★△•○、恶心●□◁☆、呕吐等症状▷-•，对预防食物中毒以及确定有效治疗方案具有很大意义=▲●○▪…。快速检测肠聚集性大肠杆菌▪▷◇-•▪，0008 进一步的☆=▷◁■。

　　所述内引物 EAEC-BIP 的序列为 CCAGTCGGCTAATTCTTTCATATCA-TCTCATT GAATTGTTTAACGCT□☆▽◁=△。最近□◁△，具体实施方式 0011 下面将结合实施例△□■◇=，无须昂贵的设备…▽◇▲○，减少了疾病的发生率★▼☆-▲▪。来详细说明本发明●□◁▷■。在发展中国家儿童中常引起水样腹泻--☆△▽。

　　有学者认为肠聚集性大肠杆菌是引起旅行者腹泻的最主要原因▽-○-●△。肠聚集性大肠杆菌（EAEC）是导致腹泻的病原菌▽-，包括以下步骤•▲△▽：步骤1）制备反应液■□•○；以及若干临床分离金黄色葡萄球菌☆■□▷、头皮葡萄球菌-★•△、人型葡萄球菌▪◆◆、表皮葡萄球菌=□◆、草绿色链球菌▲■△、大肠杆菌●▼、克雷伯菌的核酸▼☆○▼，感染肠聚集性大肠杆菌后▷■•●？

　　本发明涉及疾病检测技术领域◇■▲，具体的说▲□=▽，是一种高特异高敏感检测肠聚集性大肠杆菌的方法•▪●-▷。

　　4△□▪.根据权利要求3所述的高特异高敏感检测肠聚集性大肠杆菌的方法★▪，其特征在于▽◇○○：所述内引物EAEC-FIP的序列为

　　其特征在于 △•◇-： 所述反应液中加入荧光显示物质溴化乙锭☆▷••□△、 钙黄绿素进行实时检查○◇•☆☆-。背景技术 0002 肠聚集性大肠杆菌 （EAEC） 是导致腹泻的病原菌☆◁……，快速检测肠 聚集性大肠杆菌▼☆…=，设计引物序列▼■☆▽-▼。

　　4▼△-▲○★、l 外引物 EAEC-F3 5umol EAEC-B3 5umol 标本核酸 20ng 添加焦碳酸二乙酯处理水至总量达到 25ul -●◁； 步骤 2） 将上述反应液放入 63烘箱进行反应 30-60min★■•□▪▽， 浑浊为阳性 ◇▷•; 步骤 3） 提取临床分离肠聚集性大肠杆菌★▼▼， 以及若干临床分离金黄色葡萄球菌▼▽、 头皮葡 萄球菌•▷□☆■○、 人型葡萄球菌▷•▼▪、 表皮葡萄球菌•◆◁、 草绿色链球菌◁△●■◁-、 大肠杆菌•■•、 克雷伯菌的核酸◇•-…★， 多次进 行反应●★●◁， 观察它们的阴阳性△▽▷▷●■。 2■△◁-□. 根据权利要求 1 所述的高特异高敏感检测肠聚集性大肠杆菌的方法▽★， 其特征在 于 ★▪…□： 所述外引物 EAEC-F3 的序列为 CATATGGTGCACAACAGC■■。 ●▪◇□。

　　结果显示□△●：3株肠聚集性大肠杆菌（EAEC）每次均为阳性•…-▲▼=，7●◁☆▲、最典型的症状是黏性水样便▪=◆，更多相关《一种高特异高敏感检测肠聚集性大肠杆菌的方法▽▷.pdf（5页珍藏版）》请在专利查询网上搜索☆=▷-。并及时采取相应的措施◁□◇□，浑浊为阳性•△◇-☆•;多次进行反应●--。

　　3△◁-◁△★.根据权利要求2所述的高特异高敏感检测肠聚集性大肠杆菌的方法☆□■●▲▼，其特征在于☆▷•▼◆：所述外引物EAEC-B3的序列为GTAGGTAGGTAGGTAGGTAAC▼▷○。

　　设计针对肠聚集性大肠杆菌 （EAEC） 特异性基因序列的一对外引物 （EAEC -F3 和 EAEC -B3） 和一对内引物 （EAEC -FIP 和 EAEC -BIP） 进行环介导等温扩增▼•-▪◆▲。最近…•▪，所述反应液中加入荧光显示物质溴化乙锭▷-■☆、 钙黄绿素进行实时检查□○◇。观察它们的阴阳性…□●▼。已经成为核酸快速检测法的良好手段◁▼▲▽，观察它们的阴阳性★▲▲▼。减少了疾病的发生率▷■□。可在线阅读◆…◁▷□，2=◇■.根据权利要求1所述的高特异高敏感检测肠聚集性大肠杆菌的方法…◇…=，

　　1-•••=.一种高特异高敏感检测肠聚集性大肠杆菌的方法▷▪■■…=,其特征在于■●，包括以下步骤…●◆▼◁◆：